微生物标准菌株的保存流程

农资资讯029

微生物永久保存多少℃?

一般地,大多数菌种的保藏温度以5℃为好,像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存,而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。传代培养保存法虽然简便,但其缺点也很明显,如:

微生物标准菌株的保存流程,第1张

①菌种管棉塞经常容易发霉;

②菌株的遗传性状容易发生变异;

③反复传代时,菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;

④需要定期转种,工作量大;

⑤杂菌的污染机会较多。

农杆菌保存方法?

1.传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4—6℃冰箱内保存。

2.液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。

3.载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4.寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5.冷冻保藏法

可分低温冰箱(-20—-30℃,-50—-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。

6.冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。

长期保存菌种的方法?

液体石蜡保存法

液体石蜡保存法就是在斜面菌种或穿刺菌种表面覆盖一层液体石蜡,从而隔绝空气,减少菌种及培养物水分挥发,保藏温度要求在4℃下即可。

将培养好的菌种斜面,缓慢倒入无菌的液体石蜡,使石蜡高出斜面顶端1厘米,直立放置,低温保存就可以,霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死,酵母菌可保藏1-2年。

沙土保存法

沙土保藏法是将菌种吸附在适当的载体上,而后进行干燥的保藏。将培养好的菌种接入沙土管内,用真空泵抽气至干。细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏,前两者可保藏2年左右,有些丝状真菌甚至可保藏14-17年之久。

甘油管保存法

甘油管保存是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。配置30%浓度的无菌甘油,将培养好的菌种与甘油充分混合均匀,放入-20℃保存。

冷冻干燥保藏法

冷冻干燥保存法就是将菌种与保护剂混合均匀后,快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分,兼具低温、干燥、除氧三方。干燥后的菌种在真空环境下可长期保存。

再生者怎么储存孢子?

1、定期移植法 将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下陪养,待生长充分后,于4~6°℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

2、液体石蜡法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4~6°℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法

3、沙土管法 将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀,或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中,使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上,将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4~6℃或室温进行保存。

孢子怎么强制储存?

1、定期移植法 将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待生长充分后,于4~6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

2、液体石蜡法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于低温(4~6℃)干燥处进行保存的一种菌种保藏方法。

3、沙土管法 将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀,或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中,使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上,将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4~6℃或室温进行保存。